多克隆抗體制備的常見問題解析

　　多克隆抗體制備能識別出與免疫原蛋白具有高同源性的蛋白，或者從非免疫原物種的組織樣品中篩選靶蛋白，例如當未測試物種中的抗原性質未知時，有時會使用多克隆抗體。可識別多個結構域，即使原始抗原的一些空間結構或者序列發生小變化或者部分抗原決定簇變化，仍可以識別抗原，因此有更大的適應性。

　　多克隆抗體制備的常見問題解析：

　　1、免疫動物該如何選擇？

　　選擇宿主動物時，一般要考慮兩個問題：

　　（1）免疫效果能否保證。特別是對于蛋白抗原的情況，為了保證免疫成功，就要求宿主動物與抗原來源物種之間有較遠的親緣關系，如果不太能確定親緣關系的遠近，建議把抗原的序列與被免疫的動物相應的蛋白的序列進行一個對比，優先選擇同源性較低的物種進行免疫。

　　（2）抗血清產量的問題。根據實驗目的不同，抗血清的用量也有所不同。

　　如果后續是做Western Blot，那么只需要一點點血清就夠了，這個時候就可以選用小鼠這樣的小動物作為免疫動物，而如果想生產二抗作為商業使用，則可選用羊、驢、馬這樣的大型動物，大型動物還可以進行多次放血，以提高動物的利用率

　　2、如何選擇抗原？

　　（1）降解的蛋白抗原利于制備用于篩選細菌表達cDNA文庫或免疫沉淀。

　　（2）用于篩選真核細胞轉染系統表達的cDNA文庫或免疫沉淀，建議選用自然的蛋白抗原。

　　（3）如果制備抗*型抗體，所用抗原可以是可溶性Ig分子，或者是完整的細胞，也可以是基因工程表達產品*型決定簇、人工合成多肽及抗原化抗體等。

　　目前，以各類病原生物活體感染動物而獲得多克隆抗體（抗血清）作為檢測抗體，仍是常用方法。