單克隆抗體制備的基本原理與過(guò)程

　　單克隆抗體細(xì)胞在體外培養(yǎng)時(shí)通常使用合成培養(yǎng)基，再添加胎牛血清配成培養(yǎng)基。但是血清中成分復(fù)雜,這對(duì)純化單克隆抗體來(lái)說(shuō)是個(gè)難題, 而低純度的單克隆抗體用于臨床治療可能導(dǎo)致一系列反應(yīng)。同時(shí),血清來(lái)源有限,各批量間質(zhì)量差異大,直接影響雜交瘤細(xì)胞的連續(xù)性培養(yǎng)。
 

　　單克隆抗體制備的基本原理與過(guò)程：
 

　　原理：
 

　　B淋巴細(xì)胞在抗原的刺激下,能夠分化、增殖形成具有針對(duì)這種抗原分泌特異性抗體的能力、B細(xì)胞的這種能力和量是有限的,不可能持續(xù)分化增殖下去，因此產(chǎn)生免疫球蛋白的能力也是微小的、將這種B細(xì)胞與非分泌型的骨髓瘤細(xì)胞融合形成雜交瘤細(xì)胞，再進(jìn)一步克隆化，這種克隆化的雜交瘤細(xì)胞是既具有瘤的無(wú)限生長(zhǎng)的能力，又具有產(chǎn)生特異性抗體的B淋巴細(xì)胞的能力，將這種克隆化的雜交瘤細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)或注入小鼠體內(nèi)即可獲得大量的單一的特異性抗體.這種技術(shù)即稱為單克隆抗體技術(shù)。
 

　　制備的過(guò)程：
 

　　免疫動(dòng)物
 

　　免疫動(dòng)物是用目的抗原免疫小鼠，使小鼠產(chǎn)生致敏B淋巴細(xì)胞的 過(guò)程。 一般選用6-8周齡雌性BALB/c小鼠，按照預(yù)先制定的免疫方案進(jìn)行免疫注射。 抗原通過(guò)血液循環(huán)或淋巴循環(huán)進(jìn)入外周免疫器官，刺激相應(yīng)B淋巴細(xì)胞克隆，使其活化、增殖，并分化成為致敏B淋巴細(xì)胞。
 

　　細(xì)胞融合
 

　　采用二氧化碳?xì)怏w處死小鼠，無(wú)菌操作取出脾臟，在平皿內(nèi)擠壓研磨，制備脾細(xì)胞懸液。 將準(zhǔn)備好的同系骨髓瘤細(xì)胞與小鼠脾細(xì)胞按一定比例混合，并加入促融合劑聚乙二醇。在聚乙二醇作用下，各種淋巴細(xì)胞可與骨髓瘤細(xì)胞發(fā)生融合，形成雜交瘤細(xì)胞。