單抗制備可進行大規(guī)模的擴增培養(yǎng)

　　單抗制備對于篩選得到的陽性克隆，進行大規(guī)模的擴增培養(yǎng)，以獲得足夠數(shù)量的雜交瘤細胞。這些細胞可以在體外培養(yǎng)或注射到動物體內(如小鼠腹腔)進行繁殖。在動物體內生產(chǎn)單抗時，雜交瘤細胞會在腹腔內增殖并產(chǎn)生含有大量單抗的腹水。
 

　　從培養(yǎng)上清或腹水中收集到的單抗粗制品中，通常含有其他雜質蛋白、細胞碎片等。因此，需要通過一系列的純化步驟來獲取高純度的單抗。常用的純化方法包括蛋白A親和層析、離子交換層析、凝膠過濾層析等。這些方法基于單抗與其他雜質在物理化學性質上的差異，逐步去除雜質，提高單抗的純度。
 

　　由于細胞融合是一個隨機過程，得到的雜交瘤細胞是多種細胞的混合體，因此需要進行克隆篩選。將融合后的細胞接種于含有選擇性培養(yǎng)基的培養(yǎng)板中，只有雜交瘤細胞能夠在這種培養(yǎng)基中存活和增殖。然后，通過有限稀釋法或其他克隆化方法，將單個雜交瘤細胞分離出來，使其在培養(yǎng)基中增殖形成單個克隆。接著，采用ELISA等方法檢測每個克隆培養(yǎng)上清中的抗體，篩選出能夠分泌所需特異性單抗的陽性克隆。
 

　　對純化后的單抗進行質量鑒定是確保其質量和安全性的重要環(huán)節(jié)。鑒定內容包括單抗的純度、濃度、效價、特異性、親和力、生物學活性等。通過SDS-PAGE電泳、HPLC分析等方法檢測單抗的純度；利用ELISA、RIA等方法測定單抗的效價和特異性；通過細胞活性實驗、動物模型等評估單抗的生物學活性。
 

　　單抗制備步驟：
 

　　-抗原純度檢測：使用SDS-PAGE、Western blot等技術確認抗原純度，確保無雜蛋白干擾。
 

　　-抗原活性驗證：通過ELISA、免疫熒光等方法檢測抗原與抗體結合能力，確認其免疫原性。
 

　　-血清效價測定：采用間接ELISA法檢測免疫動物血清中抗體效價，通常以血清稀釋倍數(shù)達到1:10,000以上為理想。
 

　　-抗體特異性檢測：通過Western blot或免疫組化驗證抗體對目標抗原的特異性結合。
 

　　-融合率計算：統(tǒng)計融合后存活的雜交瘤細胞比例，理想融合率應高于80。
 

　　-有限稀釋法克隆：通過有限稀釋法對雜交瘤細胞進行亞克隆，確保單克隆性。
 

　　-抗體分泌穩(wěn)定性檢測：連續(xù)傳代觀察雜交瘤細胞分泌抗體的穩(wěn)定性，排除不穩(wěn)定細胞系。