多克隆抗體制備關(guān)于抗體的鑒定說明

　　1.制備抗原；

　　2.選擇實(shí)驗(yàn)動(dòng)物；

　　3.動(dòng)物免疫；

　　4.試取血進(jìn)行測(cè)試，看看是否成功免疫；

　　5.如果成功免疫，殺死實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，將血清全部采集；

　　6.純化出抗體；

　　7.鑒定抗體，包括純度以及特異性。

　　多克隆抗體制備的抗體鑒定說明：

　　1.抗體的效價(jià)鑒定

　　不管是用于診斷還是用于治療，制備抗體的目的都是要求較高效價(jià)。不同的抗原制備的抗體，要求的效價(jià)不一。鑒定效價(jià)的方法很多，包括有試管凝集反應(yīng)、瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA)等。常用的抗原所制備的抗體一般都有約成的鑒定效價(jià)的方法，以資比較。如制備抗抗體的效價(jià)，一般就采用瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)來鑒定。

　　2.抗體的特異性鑒定

　　抗體的特異性是指與相應(yīng)抗原或近似抗原物質(zhì)的識(shí)別能力。抗體的特異性高，它的識(shí)別能力就強(qiáng)。衡量特異性通常以交叉反應(yīng)率來表示。交叉反應(yīng)率可用競(jìng)爭(zhēng)抑制試驗(yàn)測(cè)定。以不同濃度抗原和近似抗原分別做競(jìng)爭(zhēng)抑制曲線，計(jì)算各自的結(jié)合率，求出各自在IC50時(shí)的濃度，并按相關(guān)公式計(jì)算交叉反應(yīng)率。如果所用抗原濃度IC50濃度為pg/管，而一些近似抗原物質(zhì)的IC50濃度幾乎是無窮大時(shí)，表示這一抗血清與其他抗原物質(zhì)的交叉反應(yīng)率近似為0，即該血清的特異性較好。

　　抗體的親和力是指抗體和抗原結(jié)合的牢固程度。親和力的高低是由抗原分子的大小、抗體分子的結(jié)合位點(diǎn)與抗原決定簇之間立體構(gòu)型的合適度決定的。有助于維持抗原抗體復(fù)合物穩(wěn)定的分子間力有氫鍵、疏水鍵、側(cè)鏈相反電荷基因的庫侖力、范德華力和空間斥力。親和力常以親和常數(shù)K表示，K的單位是L/mol，通常K的范圍在108-1010/mol，也有多達(dá)1014/mol。抗體親和力的測(cè)定對(duì)抗體的篩選，確定抗體的用途，驗(yàn)證抗體的均一性等均有重要意義。