抗CD44納米抗體制備與鑒定

　　急性髓系白血病（AML）是一種異質性血液癌癥，目前主要的治療方法是化療和骨髓干細胞移植，但化療的特異性和配型的成功率均較低，因而患者的治愈者并不高。基于此，已有對于AML治療的新型小分子靶向藥物和免疫靶向藥物的研究，可通過靶向AML細胞提高患者的治愈者和整體生存率。研究表明，CD44在AML細胞表面高表達，且參與AML干細胞的發(fā)生和發(fā)展，并已有靶向AML細胞表面分子CD44的治療性抗體的研究。但是，傳統(tǒng)單克隆抗體制備過程繁瑣，且人源化過程復雜，故難以將理論研究轉化到實際應用。因此，本課題選擇CD44作為靶標，并篩選易人源化的納米抗體，為進一步研制新一代治療AML的靶向性藥物奠定基礎。

　　抗CD44納米抗體制備研究方法：

　　1.CD44胞外結構域抗原的制備：構建CD44原核表達載體，轉化到大腸桿菌BL21菌株中，通過包涵體復性的方式制備抗原，并進行SDS-PAGE和ELISA分析。

　　2.抗CD44納米抗體的噬菌體文庫構建：將表達的CD44抗原對健康雙峰駝進行免疫，通過細胞分離，總RNA提取以及PCR等方法將編碼納米抗體的核酸序列連接到噬菌體載體上，構建抗CD44納米抗體的噬菌體文庫。

　　3.抗CD44納米抗體的篩選：利用噬菌體展示納米抗體和固相抗原的結合，通過數輪的“結合-洗脫-結合”后富集特異性結合的噬菌體，之后進行菌液ELISA和序列分析，從而獲得抗CD44的納米抗體。

　　4.抗CD44納米抗體的表達純化以及特異性和活性的初步研究：構建抗CD44納米抗體的表達載體，轉化到大腸桿菌WK6菌株中，經過鎳親和層析和分子篩進行純化；通過ELISA方法對抗CD44納米抗體的特異性和活性進行初步鑒定。