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    當(dāng)前位置:首頁(yè)產(chǎn)品中心抗體開發(fā)單克隆抗體/雜交瘤定制兔子單克隆抗體制備

    兔子單克隆抗體制備

    產(chǎn)品簡(jiǎn)介

    先后建立了兩套兔源單克隆抗體制備方案。這兩種方案均不依賴于兔源骨髓瘤細(xì)胞,但是其抗體的種源特性毫無疑問是兔源,在保留兔源單克隆抗體優(yōu)勢(shì)的同時(shí),大大壓縮試驗(yàn)周期,提高試驗(yàn)成功率。

    產(chǎn)品型號(hào):
    更新時(shí)間:2022-05-18
    廠商性質(zhì):代理商
    訪問量:2617
    詳細(xì)介紹在線留言

    單克隆抗體制備限于技術(shù)保護(hù)的原因,目前,兔單克隆雜交瘤細(xì)胞制備技術(shù)被一家公司壟斷,所以我們無法通過像類似制備小鼠單克隆抗體那樣,制備兔源雜交瘤細(xì)胞獲得兔源單克隆抗體。為此,公司在一大批免疫學(xué)與基因工程學(xué)專家的幫助下,先后建立了兩套兔源單克隆抗體制備方案。這兩種方案均不依賴于兔源骨髓瘤細(xì)胞,但是其抗體的種源特性毫無疑問是兔源,在保留兔源單克隆抗體優(yōu)勢(shì)的同時(shí),大大壓縮試驗(yàn)周期,提高試驗(yàn)成功率。

    方案一噬菌體展示技術(shù)

    M13單鏈絲狀噬菌體展示系統(tǒng)是目前應(yīng)用廣泛的文庫(kù)展示系統(tǒng),通過將蛋白、抗體或多肽與噬菌體pIII蛋白融合表達(dá),使之參與噬菌體組裝,并展示在噬菌體表面,形成噬菌體展示文庫(kù)。使用噬菌體展示文庫(kù),針對(duì)特定靶分子進(jìn)行3-5 輪親和篩選,可以富集能特異性結(jié)合靶分子的噬菌體,得到相應(yīng)的DNA序列信息。

    艾柏森(北京)生物科技有限公司目前開發(fā)的噬菌體展示技術(shù)服務(wù)平臺(tái)涵蓋了免疫抗體庫(kù)、天然抗體庫(kù)等常用的文庫(kù)類型,可根據(jù)客戶的特殊需求定制個(gè)性化文庫(kù),并提供靈活高效的篩選服務(wù)。在此技術(shù)儲(chǔ)備的基礎(chǔ)上,我們提供的兔源單克隆抗體噬菌體展示方案,可高效靈活的根據(jù)客戶需要大規(guī)模探測(cè)高親和力抗體,同時(shí)結(jié)合公司*的兔源Fc表達(dá)質(zhì)粒,與高效真核表達(dá)系統(tǒng),使得我們的抗體擁有*的表達(dá)效率。

    方案二重組抗體制備技術(shù)

    艾柏森(北京)生物科技開發(fā)出一種革命性的單克隆抗體生產(chǎn)技術(shù),使單克隆抗體的生產(chǎn)不sha害動(dòng)物,不依賴雜交瘤。該技術(shù)通過分離培養(yǎng)B細(xì)胞,并利用ELISA、Western Blot、IHC(Immunohistochemistry)等方法篩選出抗原特異性B細(xì)胞。再通過分子克隆的手段重組表達(dá)完整的抗體分子。該技術(shù)可用于開發(fā)高品質(zhì)的兔子和小鼠等不同物種的單克隆抗體。

    其主要依托技術(shù)有:

    高效的B細(xì)胞體外培養(yǎng)體系

    高通量B細(xì)胞篩選技術(shù)

    穩(wěn)定的VH和VL抗體分子表達(dá)體系

    高通量的抗體分子測(cè)序平臺(tái)

    兔子單克隆抗體制備服務(wù)項(xiàng)目

    服務(wù)項(xiàng)目

    (Service Items)

    周期(周)

    Time(weeks)

    方案一:

    噬菌體展示技術(shù)

    (Phage Display)

    方案二:

    異源表達(dá)重組技術(shù)

    (Heterogeneous Recombination)

    多肽

    Peptide

    小分子

    Molecular

    磷酸基/甲基/乙基化多肽

    Phosphate/Methyl/

    acetyl-specific

    目前只有針對(duì)部分腫瘤相關(guān)通路熱點(diǎn)分子的抗原,詳情請(qǐng)與公司技術(shù)人員溝通

    多肽設(shè)計(jì)與合成

    Peptide design & synthesis

    多肽設(shè)計(jì)

    Peptide design

    ~2

    可選,免費(fèi)

    多肽合成

    Peptide synthesis

       

       

    小分子或多肽偶聯(lián)

    conjugation

     

     

     

    免疫階段

    Immunization

    免疫2只兔子

    Immunized 2 rabbits

    ~8

    ELISA檢測(cè)

    Elisa detection

    cDNA制備

    cDNA preparation

    逆轉(zhuǎn)錄制備cDNA文庫(kù)

    prepare cDNA library by RT-PCR

    ~1

    cDNA 文庫(kù)質(zhì)檢

    cDNA library QC check

    構(gòu)建Fab抗體庫(kù)

    Fab library   construction

    VH與VL基因獲得

    obtained VH and VL   genes

    10~15

    構(gòu)建初級(jí)抗體庫(kù)

    primary antibody   library construction

    構(gòu)建Fab抗體庫(kù)

    Fab library   construction

    噬菌體篩選

    phage screening

    噬菌體顆粒包裝

    phage particles package

    10~15

     

    磁珠親和篩選

    magnetic beads affinity screening

     

    陽(yáng)性克隆回收基因測(cè)序

    Recover positive clones and DNA sequencing

     

    抗體表達(dá)

    Antibody expression

    特異性雙鏈基因合成與Fc基因橋接

    synthetic of target   phage gene and Fc gene

    ~5

    構(gòu)建真核表達(dá)載體

    Eukaryotic system   expression plasmids construction

    真核表達(dá)

    Eukaryotic system   expression

     

    穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞系構(gòu)建

    Stably transfected   cell line construction

         

    純化與檢測(cè)

    Purification and detection

    標(biāo)簽純化

    Tag affinity purification

    ~1

    特異性親和純化

    Antigen specific affinity purification

    總周期(月)

    Total lead   time(months)

    7~9

    3~5

                           

    注:

    單克隆抗體制備價(jià)格面議;

    請(qǐng)慎重考慮周期事宜,以上時(shí)間僅為理想條件下短周期;

    為了縮短試驗(yàn)周期建議考慮自行提供抗原直接免疫做起;

    免疫環(huán)節(jié)設(shè)立驗(yàn)收節(jié)點(diǎn),效價(jià)合格,取脾臟,效價(jià)不合格,終止實(shí)驗(yàn);

    抗體庫(kù)構(gòu)建步驟啟動(dòng)之前,至少支付此步驟的50%全款;完成項(xiàng)目,支付尾款。

     

    單克隆抗體制備服務(wù)組合:

    客戶:提供抗原蛋白信息

    制備流程:

    1)抗原制備質(zhì)粒表達(dá)蛋白純化多肽設(shè)計(jì)合成及交聯(lián);

    2)免疫:*免疫兔子2只,失敗后又加免3只;

    3)ELISA/Western-blot試驗(yàn)監(jiān)控兔子血清中的抗體效價(jià)和特異性,根據(jù)ELISA和WB檢測(cè),篩選兔子;

    4)cDNA文庫(kù)制備與噬菌體載體構(gòu)建;

    5)磁珠鏈霉素親和篩選;

    6)陽(yáng)性克隆測(cè)序與基因合成橋接;

    7)真核表達(dá)質(zhì)粒構(gòu)建;

    8)穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞構(gòu)建;

    9)試表達(dá)鑒定與結(jié)果交付;

    交付產(chǎn)品(每種抗原,所有兔子總共的)

    1)1株針對(duì)免疫原特異性的單克隆雜交瘤細(xì)胞株

    2)1ml(濃度約0.1~1mg/ml)純化的抗體,Elisa效價(jià)應(yīng)至少1:200以上;

    制備時(shí)間:3~6個(gè)月

    兔子單克隆抗體制備成功案例:

    Publication: Plos One

    IF:3.05

    Title:TSC1/2 signaling complex is essential for peripheral naïve CD8+ T   cell survival and homeostasis in mice.

    Name:anti- Tuberin antibody

    Species: Mouse

    Type:Rabbit Recombination Monoclonal antibody

     

    兔子單克隆抗體制備.1.jpg

    兔子單克隆抗體制備.2.png

    Immunohistochemical analysis ofparaffin-embedded mouse placenta tissue using anti-Tuberin antibody. Counterstained with hematoxylin.

    Recommended constration: 1:200

     

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