穩(wěn)定細(xì)胞系構(gòu)建

服務(wù)簡介：

與瞬時轉(zhuǎn)染不同，穩(wěn)定細(xì)胞系是指外源基因進(jìn)入受體細(xì)胞，并整合到細(xì)胞的染色體上，使得宿主可以長期表達(dá)目的基因。穩(wěn)定細(xì)胞系表達(dá)蛋白（抗體）的穩(wěn)定性更好，批次間差異也更小，然而構(gòu)建一個有效的細(xì)胞系是一件復(fù)雜而費(fèi)時的工作——艾柏森專業(yè)的生物醫(yī)藥研發(fā)服務(wù)機(jī)構(gòu)，擁有豐富的哺乳動物細(xì)胞培養(yǎng)經(jīng)驗(yàn)，基于公司多樣的成熟平臺，為您提供優(yōu)質(zhì)的穩(wěn)定細(xì)胞系構(gòu)建服務(wù)。

本公司服務(wù)包括但不限于下列服務(wù)項(xiàng)目：
1、基因過表達(dá)穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞細(xì)胞系構(gòu)建服務(wù)（基因過表達(dá)多克隆細(xì)胞株構(gòu)建服務(wù)、基因過表達(dá)單克隆細(xì)胞株構(gòu)建服務(wù)）：

因過表達(dá)細(xì)胞株構(gòu)建服務(wù)包括目的基因過表達(dá)慢病毒載體構(gòu)建、病毒包裝、細(xì)胞轉(zhuǎn)染和篩選。您只需提供目的基因的cDNA質(zhì)粒和需要構(gòu)建的細(xì)胞系，我們將按照您的要求完成目的基因過表達(dá)細(xì)胞株的構(gòu)建和檢測，提供給您高質(zhì)量的基因過表達(dá)穩(wěn)定細(xì)胞株。
2、RNA干擾基因敲減穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株篩選服務(wù)（RNA干擾基因敲減細(xì)胞株多克隆構(gòu)建服務(wù)、RNA干擾基因敲減細(xì)胞株單克隆構(gòu)建服務(wù)）：

艾柏森的RNA干擾基因敲減細(xì)胞系構(gòu)建基于慢病毒表達(dá)系統(tǒng)，一般采用U6啟動子驅(qū)動的pLVshRNA-puro或pLVshRNA-EGFP(2A)puro載體構(gòu)建RNA干擾穩(wěn)定細(xì)胞株，服務(wù)內(nèi)容包括干擾載體構(gòu)建、靶點(diǎn)篩選、干擾效率驗(yàn)證及穩(wěn)定細(xì)胞篩選和克隆。

3、CRISPR基因敲除穩(wěn)定細(xì)胞株構(gòu)建服務(wù)：

隨著talen和Cas9/gRNA基因敲除系統(tǒng)的出現(xiàn)，基因定點(diǎn)敲除的難度大幅下降。全新的技術(shù)將基因敲除從價格高昂，耗時漫長的ZNF系統(tǒng)，逐漸變成簡便的研究工具。現(xiàn)在我們可提供Talen和Cas9/gRNA兩個系統(tǒng)的基因敲除服務(wù)。包括基因敲除靶點(diǎn)設(shè)計(jì)，talen質(zhì)粒組裝，Cas9/gRNA質(zhì)粒構(gòu)建及基因敲除效率驗(yàn)證。

穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞株服務(wù)流程：
a、載體構(gòu)建：將外源基因構(gòu)建到合適的載體上。
b、細(xì)胞篩選濃度測定：以10-14天細(xì)胞全部死亡的抗生素濃度為篩選濃度。
c、細(xì)胞接種：轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)前天接種細(xì)胞，各種細(xì)胞的平板密度依據(jù)各種細(xì)胞的生長率和細(xì)胞形狀而定。進(jìn)行轉(zhuǎn)染當(dāng)天細(xì)胞應(yīng)達(dá)到60%-80%覆蓋。
d、細(xì)胞轉(zhuǎn)染：用構(gòu)建好的載體轉(zhuǎn)染目的細(xì)胞。
e、使用抗生素對細(xì)胞進(jìn)行篩選。
f、篩選結(jié)果鑒定；

穩(wěn)定細(xì)胞株篩選方法：

1、轉(zhuǎn)染質(zhì)粒后，單克隆方法篩選穩(wěn)定細(xì)胞系：對大多數(shù)細(xì)胞轉(zhuǎn)染效率較低。對于基因過表達(dá)，如果轉(zhuǎn)染效率達(dá)到40%，基因過表達(dá)尚可。但是對于基因干擾實(shí)驗(yàn)，對轉(zhuǎn)染效率要求遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于基因過表達(dá)，通常質(zhì)粒轉(zhuǎn)染無法滿足。

另外，質(zhì)粒游離于細(xì)胞質(zhì)中，很快降解，無法滿足較長時間的檢測項(xiàng)目；質(zhì)粒轉(zhuǎn)染整合幾率極低，穩(wěn)定細(xì)胞株構(gòu)建耗時耗力，且得率很低，往往需要挑取單克隆株。
2、病毒感染篩選穩(wěn)定細(xì)胞株：病毒感染方法較質(zhì)粒轉(zhuǎn)染篩選單克隆方法更方便和高效，是目前主流的穩(wěn)定細(xì)胞系篩選方法。用慢病毒制備穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株，由于其高效整合、高效轉(zhuǎn)錄、高效表達(dá)、宿主范圍廣，感染效率高，且與細(xì)胞染色體整合而不發(fā)生基因重排，是制備穩(wěn)定細(xì)胞株的理想載體。 
服務(wù)優(yōu)勢：
1、穩(wěn)定：保證15代以內(nèi)穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞穩(wěn)定表達(dá)。
2、迅速：一般控制在1個月以內(nèi)完成構(gòu)建。
3、經(jīng)濟(jì)：價格實(shí)惠，性價比高。
4、質(zhì)量保證：對外源基因進(jìn)行嚴(yán)格鑒定。