穩定細胞系構建

服務簡介：

與瞬時轉染不同，穩定細胞系是指外源基因進入受體細胞，并整合到細胞的染色體上，使得宿主可以長期表達目的基因。穩定細胞系表達蛋白（抗體）的穩定性更好，批次間差異也更小，然而構建一個有效的細胞系是一件復雜而費時的工作——艾柏森專業的生物醫藥研發服務機構，擁有豐富的哺乳動物細胞培養經驗，基于公司多樣的成熟平臺，為您提供優質的穩定細胞系構建服務。

本公司服務包括但不限于下列服務項目：
1、基因過表達穩轉細胞細胞系構建服務（基因過表達多克隆細胞株構建服務、基因過表達單克隆細胞株構建服務）：

因過表達細胞株構建服務包括目的基因過表達慢病毒載體構建、病毒包裝、細胞轉染和篩選。您只需提供目的基因的cDNA質粒和需要構建的細胞系，我們將按照您的要求完成目的基因過表達細胞株的構建和檢測，提供給您高質量的基因過表達穩定細胞株。
2、RNA干擾基因敲減穩轉細胞株篩選服務（RNA干擾基因敲減細胞株多克隆構建服務、RNA干擾基因敲減細胞株單克隆構建服務）：

艾柏森的RNA干擾基因敲減細胞系構建基于慢病毒表達系統，一般采用U6啟動子驅動的pLVshRNA-puro或pLVshRNA-EGFP(2A)puro載體構建RNA干擾穩定細胞株，服務內容包括干擾載體構建、靶點篩選、干擾效率驗證及穩定細胞篩選和克隆。

3、CRISPR基因敲除穩定細胞株構建服務：

隨著talen和Cas9/gRNA基因敲除系統的出現，基因定點敲除的難度大幅下降。全新的技術將基因敲除從價格高昂，耗時漫長的ZNF系統，逐漸變成簡便的研究工具。現在我們可提供Talen和Cas9/gRNA兩個系統的基因敲除服務。包括基因敲除靶點設計，talen質粒組裝，Cas9/gRNA質粒構建及基因敲除效率驗證。

穩定轉染細胞株服務流程：
a、載體構建：將外源基因構建到合適的載體上。
b、細胞篩選濃度測定：以10-14天細胞全部死亡的抗生素濃度為篩選濃度。
c、細胞接種：轉染實驗前天接種細胞，各種細胞的平板密度依據各種細胞的生長率和細胞形狀而定。進行轉染當天細胞應達到60%-80%覆蓋。
d、細胞轉染：用構建好的載體轉染目的細胞。
e、使用抗生素對細胞進行篩選。
f、篩選結果鑒定；

穩定細胞株篩選方法：

1、轉染質粒后，單克隆方法篩選穩定細胞系：對大多數細胞轉染效率較低。對于基因過表達，如果轉染效率達到40%，基因過表達尚可。但是對于基因干擾實驗，對轉染效率要求遠遠高于基因過表達，通常質粒轉染無法滿足。

另外，質粒游離于細胞質中，很快降解，無法滿足較長時間的檢測項目；質粒轉染整合幾率極低，穩定細胞株構建耗時耗力，且得率很低，往往需要挑取單克隆株。
2、病毒感染篩選穩定細胞株：病毒感染方法較質粒轉染篩選單克隆方法更方便和高效，是目前主流的穩定細胞系篩選方法。用慢病毒制備穩轉細胞株，由于其高效整合、高效轉錄、高效表達、宿主范圍廣，感染效率高，且與細胞染色體整合而不發生基因重排，是制備穩定細胞株的理想載體。 
服務優勢：
1、穩定：保證15代以內穩定轉染細胞穩定表達。
2、迅速：一般控制在1個月以內完成構建。
3、經濟：價格實惠，性價比高。
4、質量保證：對外源基因進行嚴格鑒定。