PCR/Q-PCR/RT-PCR實驗

聚合酶鏈式反應(yīng)是一種用于放大擴增特定的DNA的片段的分子生物學(xué)技術(shù)。

實時熒光定量PCR（Q-PCR）技術(shù)利用熒光信號的變化實時檢測PCR擴增反應(yīng)中每一個循環(huán)擴增產(chǎn)物量的變化，終對起始模板進行精確的定量分析。實時熒光定量PCR的檢測方法分為SYBRGreen I法和TaqMan探針法等。在研究領(lǐng)域中，qPCR廣泛應(yīng)用于細胞中的基因拷貝數(shù)的測定，其常與反轉(zhuǎn)錄PCR（RT-PCR）一起使用以精確測定基因表達量，如通過檢測細胞mRNA水平可以測定不同環(huán)境或藥物作用下基因表達的情況。

RT -PCR即逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)，是將RNA的反轉(zhuǎn)錄（RT）和cDNA的聚合酶鏈式擴增反應(yīng)（PCR）相結(jié)合的技術(shù)。分為兩步法和一步法RT-PCR。 一步法RT-PCR能克隆微量mRNA而不需構(gòu)建cDNA文庫,即cDNA合成與PCR反應(yīng)在同一Buffer及酶中進行,一步法完成,省略了cDNA與PCR之間的過程。一步法需要基因特異性引物，適合從大量的RNA樣本中得到少量基因（數(shù)目）的信息。兩步法RT-PCR:首先用反轉(zhuǎn)錄酶AMV、M-Mulv或TthDNA聚合酶合成cDNA,然后以cDNA為模板進行PCR。兩步法即*行cDNA合成再進行PCR操作，適合從少量的RNA樣本中得到大量基因（數(shù)目）的信息。