慢病毒轉(zhuǎn)染穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞系構(gòu)建

慢病毒構(gòu)建并包裝后，以進(jìn)行貼壁細(xì)胞或懸浮細(xì)胞的轉(zhuǎn)染。具體流程如下：

1.    對(duì)慢病毒基因進(jìn)行改造，即敲除U3端的400bp的特定基因，使其逆轉(zhuǎn)錄和整合的能力，但保留產(chǎn)生病毒顆粒必須的蛋白的能力。

2.    向上述基因中插入目的基因。與具有包裝功能的質(zhì)粒同時(shí)進(jìn)行對(duì)包裝細(xì)胞的轉(zhuǎn)染。在細(xì)胞上清中獲得攜帶目的基因的復(fù)制缺陷型慢病毒載體顆粒。

3.    使用上述獲得的慢病毒顆粒轉(zhuǎn)染目的細(xì)胞。

4.    根據(jù)慢病毒攜帶的標(biāo)記基因，轉(zhuǎn)染得到的細(xì)胞進(jìn)行熒光蛋白檢測(cè)或加入抗生素進(jìn)行細(xì)胞篩選。

5.  熒光性強(qiáng)或者克隆數(shù)多的細(xì)胞系加以傳代培養(yǎng)并保存。

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