ELISA/Elispot實(shí)驗(yàn)

酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定enzyme linked immunosorbent assay（ELISA）指將可溶性的抗原或抗體結(jié)合到聚苯乙烯等固相載體上，利用抗原抗體結(jié)合專一性進(jìn)行免疫反應(yīng)的定性和定量檢測(cè)方法。分為夾心法，間接法和競(jìng)爭(zhēng)法三種。

雙抗夾心是檢測(cè)抗原常用的方法，操作流程：

1.        將特異性抗體與固相載體連接形成固相抗體：洗滌除去未結(jié)合的抗體及雜質(zhì)　　

2.        加受檢標(biāo)本：使之與固相抗體接觸反應(yīng)一段時(shí)間讓標(biāo)本中的抗原與固相載體上的抗體結(jié)合形成固相抗原復(fù)合物，洗滌除去其他未結(jié)合的物質(zhì)　　

3.        加酶標(biāo)抗體：使固相免疫復(fù)合物上的抗原與酶標(biāo)抗體結(jié)合，*洗滌未結(jié)合的酶標(biāo)抗體　

4.        加底物：夾心式復(fù)合物中的酶催化底物成為有色產(chǎn)物根據(jù)顏色反應(yīng)的程度進(jìn)行該抗原的定性或定量　

酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)檢測(cè)（Enzyme-linked Immunospot Assay，ELISPOT）法源自ELISA，又突破傳統(tǒng)ELISA法，是定量ELISA技術(shù)的延伸和新的發(fā)展。原理：用抗體捕獲培養(yǎng)中的細(xì)胞分泌的細(xì)胞因子，并以酶聯(lián)斑點(diǎn)顯色的方式將其表現(xiàn)出來(lái)。