單抗制備的生產(chǎn)及純化方法

抗體是機(jī)體在抗原刺激下產(chǎn)生的能與該抗原特異性結(jié)合的免疫球蛋白。常規(guī)的抗體制備是通過動(dòng)物免疫并采集抗血清的方法產(chǎn)生的，因而抗血清通常含有針對(duì)其他無關(guān)抗原的抗體和血清中其他蛋白質(zhì)成分。一般的抗原分子大多含有多個(gè)不同的抗原決定簇，所以常規(guī)抗體也是針對(duì)多個(gè)不同抗原決定簇抗體的混合物。即使是針對(duì)同一抗原決定簇的常規(guī)血清抗體，仍是由不同B細(xì)胞克隆產(chǎn)生的異質(zhì)的抗體組成。單抗制備的生產(chǎn)及純化方法：(1)動(dòng)物體內(nèi)生產(chǎn)單抗①成年BALB/c小鼠腹腔接種降植烷或液體石蠟，每只小鼠0.3-0.5ml...

淺析多抗制備的正確方法

多抗制備方法：當(dāng)將抗原注射入實(shí)驗(yàn)動(dòng)物體內(nèi)時(shí)，一系列抗體生成細(xì)胞會(huì)不同程度的與抗原結(jié)合，受抗原刺激后在血液中產(chǎn)生不同類型的抗體，這種由一種抗原刺激產(chǎn)生的抗體稱為多克隆抗體。多克隆抗體中不同的抗體分子可以以不同的親和能力與抗原分子表面不同的部分一抗原決定簇相結(jié)合。將抗原導(dǎo)入敏感動(dòng)物體內(nèi)后，可刺激網(wǎng)狀內(nèi)皮細(xì)胞系統(tǒng)，尤其是淋巴結(jié)和脾臟中的淋巴細(xì)胞大量增殖。如圖所示，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物對(duì)初次免疫和二次免疫的應(yīng)答有明顯的不同。通常初次免疫應(yīng)答往往比較弱，尤其是針對(duì)于易代謝，可溶性的抗原。注射后大約...

噬菌體篩選的相關(guān)知識(shí)點(diǎn)介紹

將編碼多肽的外源DNA片段與噬菌體表面蛋白的編碼基因融合(插入信號(hào)肽與衣殼蛋白基因間)后，以融合蛋白的形式呈現(xiàn)在噬菌體的表面，每個(gè)噬菌體只含1個(gè)外源基因，被展示的多肽或蛋白可保持相對(duì)的空間結(jié)構(gòu)和生物活性，展示在噬菌體的表面。導(dǎo)入了各種各樣外源基因的一群噬菌體，就構(gòu)成一個(gè)展示各種各樣外源肽的噬菌體展示庫。噬菌體篩選展示局限性：1、肽庫容量受大腸桿菌轉(zhuǎn)化效率影響，容量一般在109，高于此限制的較多基因?qū)㈦y以表達(dá)；2、編碼多肽的基因帶有一定的密碼子偏愛性，限制了肽庫的復(fù)雜度；3、噬...

單抗制備為什么免疫后沒有效價(jià)或免疫后效價(jià)低？

單抗制備會(huì)由于亞克隆細(xì)胞生長環(huán)境不合適，導(dǎo)致融合細(xì)胞染色體丟失，分泌特性改變，親和力從高變低，這時(shí)就需要及時(shí)更換培養(yǎng)液，當(dāng)細(xì)胞增長到一定密度的時(shí)候，培養(yǎng)基就開始變顏色，影響融合細(xì)胞的生長，造成染色體丟失；控制好細(xì)胞的密度，密度過大使新加入的培養(yǎng)基不至于很快被消耗，影響融合細(xì)胞的生長，造成染色體丟失；不要過于頻繁操作細(xì)胞，當(dāng)細(xì)胞生長密度不是很大的時(shí)候，不要頻繁操作，否則細(xì)胞容易出現(xiàn)死亡或者生長形態(tài)發(fā)生明顯變化。單抗制備為什么免疫后沒有效價(jià)或免疫后效價(jià)低？（1）設(shè)計(jì)的抗原與被免疫...

單克隆抗體制備技術(shù)的應(yīng)用案例

單克隆抗體制備是相對(duì)于多克隆抗體而言的。單克隆抗體指由單一的漿細(xì)胞克隆所產(chǎn)生的高度均一、僅針對(duì)某一抗原表位的抗體。當(dāng)機(jī)體受到抗原刺激后，B淋巴細(xì)胞被抗原決定簇激活，增殖分化出大量的漿細(xì)胞，而后由漿細(xì)胞分泌出特異性抗體。1957年，生物學(xué)家伯內(nèi)特提出了克隆選擇學(xué)說：動(dòng)物的每個(gè)B淋巴細(xì)胞都有其*的受體，在受到外界抗原刺激時(shí)，特定的B細(xì)胞會(huì)發(fā)生免疫反應(yīng)，迅速增殖分化產(chǎn)生相應(yīng)抗體，抵御抗原的入侵。隨后，人們發(fā)現(xiàn)無論是在體內(nèi)的腫瘤細(xì)胞還是移植到體外培養(yǎng)的腫瘤細(xì)胞都具有無限傳代的特點(diǎn)，1...

有助于提高蛋白表達(dá)目的的實(shí)驗(yàn)方案

克隆基因在細(xì)胞中表達(dá)對(duì)理論研究和實(shí)驗(yàn)應(yīng)用都具有重要的意義。通過表達(dá)能探索和研究基因的功能以及基因表達(dá)調(diào)控的機(jī)理，同時(shí)克隆基因表達(dá)出所編碼的蛋白質(zhì)可供作結(jié)構(gòu)與功能的研究。大腸桿菌是目前應(yīng)用廣泛的蛋白表達(dá)系統(tǒng)，其表達(dá)外源基因產(chǎn)物的水平遠(yuǎn)高于其它基因表達(dá)系統(tǒng)，表達(dá)的目的蛋白量甚至能超過細(xì)菌總蛋白量的80%。本實(shí)驗(yàn)中，攜帶有目標(biāo)蛋白基因的質(zhì)粒在大腸桿菌BlL21中，在37℃，IPTG誘導(dǎo)下，超量表達(dá)攜帶有6個(gè)連續(xù)組氨酸殘基的重組氯霉素酰基轉(zhuǎn)移酶蛋白，該蛋白可用一種通過共價(jià)偶連的次氨基...

噬菌體篩選方法你知道嗎？

噬菌體篩選是一項(xiàng)高通量地淘選具有特定結(jié)合能力的多肽或抗體的分子生物學(xué)技術(shù)，也是目前抗體藥篩選過程中使用非常廣泛的一種技術(shù)平臺(tái)。噬菌體展示技術(shù)可對(duì)人和其他動(dòng)物的B細(xì)胞抗體庫進(jìn)行體外建庫篩選，避開了免疫和細(xì)胞融合等步驟，從而縮短了實(shí)驗(yàn)周期并降低了鼠源抗體的免疫原性。噬菌體篩選步驟：將經(jīng)過誘變和加熱處理的生產(chǎn)菌株孢子或細(xì)胞懸浮液0.5ml涂布到生產(chǎn)菌株的平板培養(yǎng)基上，表面干燥后加入0.1ml保存的噬菌體原液，涂布均勻后置適溫下培養(yǎng)48~72h，觀察噬菌斑的形成并計(jì)數(shù)（如無噬菌體原液...

抗CD44納米抗體制備與鑒定

急性髓系白血病（AML）是一種異質(zhì)性血液癌癥，目前主要的治療方法是化療和骨髓干細(xì)胞移植，但化療的特異性和配型的成功率均較低，因而患者的治愈者并不高。基于此，已有對(duì)于AML治療的新型小分子靶向藥物和免疫靶向藥物的研究，可通過靶向AML細(xì)胞提高患者的治愈者和整體生存率。研究表明，CD44在AML細(xì)胞表面高表達(dá)，且參與AML干細(xì)胞的發(fā)生和發(fā)展，并已有靶向AML細(xì)胞表面分子CD44的治療性抗體的研究。但是，傳統(tǒng)單克隆抗體制備過程繁瑣，且人源化過程復(fù)雜，故難以將理論研究轉(zhuǎn)化到實(shí)際應(yīng)用。...